酶的催化活性測定分析

在進行酶的催化活性測定分析前，先了解下酶的定義

酶活單位最初是由第一個發(fā)現(xiàn)酶并對酶進行描述的研究者來定義的。因此在一些較早的 文獻中，酶的活性以任意各種形式來表示，如吸光度的變化、還原基團的增加，以mg 或µg 表示的被轉(zhuǎn)化底物的數(shù)量。這些參數(shù)和各種時間單位，如1min、30min 或1h。

1961 年，世界生物化學(xué)協(xié)會酶學(xué)委員會用國際單位U 來定義酶的活性，定義為在優(yōu)化 的標(biāo)準(zhǔn)條件下，1U 即每分鐘催化1mol 的底物的量。 有關(guān)酶基本的國際單位（SI），世界臨床化學(xué)家協(xié)會數(shù)量和單位專家小組以及國際理論 和應(yīng)用化學(xué)聯(lián)合會臨床化學(xué)數(shù)量和單位委員會定義了一個基本單位，katal，定義為測定體系 中，每秒鐘催化1mol 的轉(zhuǎn)化反應(yīng)速率所需要的酶的數(shù)量，但這個單位并不常用。 每一次測定中必須標(biāo)明溫度。通常，在0～40℃范圍內(nèi)，溫度每提高10℃酶催化反應(yīng)的 速率會變?yōu)? 倍。而為獲得可重復(fù)性的結(jié)果，必須精確控制溫度，并保持其恒定。 但由于許多實際的原因，對于許多酶反應(yīng)的監(jiān)控并不能夠通過消耗的底物或生成的產(chǎn)物 的化學(xué)計量來實現(xiàn)。因此，對于某一特定的酶，它的催化活性也許根本不能用國際單位來表 示。 在分子生物學(xué)中，大部分的酶的單位定義相當(dāng)隨意。例如，限制性內(nèi)切酶（E.C.3.1.21.3-5） 的酶活定義為：在一定的溫育條件下，酶使DNA 某一特定鍵斷裂，在電泳后可以檢測到的 精確數(shù)量（通常1g）的DNA 時酶的催化活性。 還有其他一些定義這些酶活的參數(shù)，如以微克、納摩爾、吸光度單位或者是堿基對的數(shù) 目來表示的核酸降解以及核苷在核酸分子中的結(jié)合，由于一些實際的原因，不同的時間周期 如1min、10min 、30min 或60min 被選作參考。

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酶作為生物催化劑，提高了反應(yīng)的速率或允許該反應(yīng)進行。
因此，可以檢測底物的轉(zhuǎn) 化率υ 來確定酶的催化活性。
酶動力學(xué)的各個方程中，底物的濃度保持在一個遠遠高于米氏常數(shù)的水平上，這樣， 所有的酶都被底物所飽和，反應(yīng)以恒速即最大速率進行。因此，酶的催化活性與所用的酶量 線性相關(guān)。在酶的活性的測定中，往往要設(shè)法達到這一條件。